**章导言／1
一、 生物技术主要概念1
二、生物技术实验室的安全性1
三、生物技术实验基本要求3
四、生物技术常用实验仪器的使用5
参考文献12
第二章植物细胞工程实验技术／13
实验一培养基的配制、消毒与接种13
实验二植物愈伤组织诱导及分化培养20
实验三花药培养25
实验四细胞悬浮培养29
实验五原生质体的游离、培养与融合32
实验六植物细胞的生长计量技术38
实验七植物快速无性繁殖41
实验八细胞大规模培养及人工种子制备46
实验九农杆菌介导的植物遗传转化50
参考文献53
第三章微生物工程实验技术／54
实验一培养基的配制及灭菌54
实验二菌种的分离纯化61
实验三微生物形态的观察和革兰氏染色法63
实验四稀释平板计数法和细菌生长曲线的测定66
实验五发酵罐的构造与实罐灭菌69
实验六谷氨酸发酵工程系列实验73
Ⅰ谷氨酸菌种的制备74
Ⅱ谷氨酸的中糖发酵及控制76
Ⅲ谷氨酸发酵过程还原糖含量的测定78
Ⅳ谷氨酸含量的测定与等电点回收79
实验七啤酒发酵工程系列实验80
Ⅰ协定法糖化试验82
Ⅱ啤酒酵母纯种分离83
Ⅲ啤酒酵母的计数84
Ⅳ啤酒酵母的质量检查86
Ⅴ啤酒酵母的扩大培养88
Ⅵ麦芽汁的制备89
Ⅶ糖度的测定91
Ⅷ啤酒主发酵93
Ⅸ酸度和pH值的测定94
Ⅹ酒精度的测定及原麦芽汁浓度的计算95
Ⅺ色度的测定98
Ⅻ苦味质的测定99
ⅩⅢ啤酒质量品评100
参考文献103
第四章蛋白质、核酸的提取与分离／104
实验一溶菌酶的提纯与结晶104
实验二果实菠萝蛋白酶的活力测定106
实验三酪蛋白的分离提取107
实验四双缩脲法定量测定酪蛋白的含量110
实验五植物基因组DNA提取111
实验六质粒DNA的分离提取113
实验七植物RNA提取115
参考文献117
第五章层析、色谱及电泳技术／118
实验一可溶性糖的硅胶G薄层层析118
实验二迷迭香挥发油的气相色谱定量分析121
实验三反相高效液相色谱法测定饮料中的苯甲酸与山梨酸123
实验四DNA琼脂糖凝胶电泳124
实验五SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量126
实验六非同位素银染DNA测序技术131
实验七纤维素薄膜电泳分离血清蛋白及永久胶片制作139
参考文献143
第六章聚合酶链反应／144
实验一常规PCR法扩增目的潮霉素基因片段144
实验二PCR法制备潮霉素基因探针147
实验三反转录PCR149
实验四随机引物PCR152
参考文献154
第七章分子杂交技术／155
实验一核酸分子杂交技术156
实验二Western杂交158
参考文献161
第八章基因重组及基因文库构建／162
实验一DNA酶切、片段回收与重组连接162
实验二重组体DNA遗传转化与克隆筛选165
实验三真核生物基因组文库的构建168
实验四cDNA文库的构建172
实验五真菌Hog1及Pbs2基因功能验证180
参考文献185
附录／186
附录一常用激素的溶解186
附录二常用消毒剂的使用和效果186
附录三植物组织培养常用的培养基配方186
附录四Kao和Minchayluk的KM8P培养基187
附录五细胞筛孔径(μm)与目换算表188
附录六GUS染色方法188
附录七主要溶液(母液)及缓冲液配制189
附录八常见市售酸碱的浓度191
附录九基因组文库载体的种类和特征191
附录十生命科学常用实验仪器名称中英文对照191
附录十一几种主要的限制性核酸内切酶及其作用位点193
附录十二几种主要的质粒载体的酶切位点及其选择标记194
附录十三实验报告参考式样197
附录十四有关警告标志图200