第一章 双光子荧光成像的概述

　1.1 双光子荧光成像的概念

　　1.1.1 现代分析方法

　　1.1.2 双光子荧光成像技术

　1.2 双光子荧光成像的特点和发展简史

　　1.2.1 双光子荧光成像的特点

　　1.2.2 双光子吸收的概念

　　1.2.3 双光子荧光检测的特点

　　1.2.4 双光子显微成像的发展简史

　1.3 双光子荧光成像的应用

　1.4 双光子荧光检测的发展趋势

　1.5 参考文献

第二章 双光子荧光成像理论

　2.1 荧光显微镜

　　2.1.1 荧光显微镜的特殊结构

　　2.1.2 荧光显微镜的要求

　　2.1.3 荧光显微镜的类别

　2.2 双光子荧光成像

　　2.2.1 双光子激发概述

　　2.2.2 双光子荧光共焦显微成像

　　2.2.3 双光子荧光强度的空间分布

　　2.2.4 双光子荧光成像的原理

　　2.2.5 双光子荧光共聚焦显微镜的成像理论

　2.3 双光子荧光显微镜的光学特点

　　2.3.1 双光子荧光显微镜的光学特点

　　2.3.2 双光子吸光材料的特点

　　2.3.3 双光子荧光显微镜的优点及存在问题

　2.4 参考文献

第三章 双光子荧光成像设备

　3.1 概述

　　3.1.1 双光子荧光显微镜的特殊要求

　　3.1.2 透射式和落射式荧光显微镜

　3.2 双光子共焦荧光显微镜结构

　　3.2.1 共焦荧光显微镜配制及原理

　　3.2.2 双光子荧光显微成像优点及缺点

　3.3 常见双光子荧光显微镜的特点

　　3.3.1 LaVision BioTec的双光子显微镜

　　3.3.2 莱卡（Leica）双光子荧光显微镜

　　3.3.3 蔡司（Zeiss）双光子荧光显微镜

　　3.3.4 奥林巴斯（Olympus）双光子荧光显微镜

　　3.3.5 百乐（Bio—Rad）双光子荧光显微镜

　　3.3.6 Nikon A1RMP双光子显微镜

　3.4 双光子荧光显微镜的操作

　　3.4.1 系统的使用

　　3.4.2 软件的快速使用说明

　　3.4.3 关机顺序

　　3.4.4 系统的维护

　3.5 参考文献

第四章 细胞和组织的双光子荧光成像

　4.1 细胞培养的基本知识

　　4.1.1 基本概念

　　4.1.2 细胞培养的无菌环境

　　4.1.3 常用培养器皿清洗及消毒

　4.2 细胞培养基

　　4.2.1 水与平衡盐溶液

　　4.2.2 细胞培养基的基本要求

　　4.2.3 天然细胞培养基

　　4.2.4 合成细胞培养基

　4.2.5 无血清技术及其培养基

　　4.2.6 无蛋白培养基与限定化学成分培养基

　　4.2.7 其他细胞培养用液

　4.3 细胞培养的基本方法

　　4.3.1 培养细胞的细胞生物学

　　4.3.2 培养细胞的生长和增殖

　　4.3.3 细胞分离培养技术

　　4.3.4 培养物的污染及防止

　4.4 常见组织细胞的培养方法

　　4.4.1 鸡胚成纤维细胞原代培养

　　4.4.2 神经细胞培养

　　4.4.3 外周血淋巴细胞分离培养

　4.5 组织化学双光子荧光成像

　　4.5.1 组织化学技术原理与意义

　　4.5.2 组织化学研究技术

　　4.5.3 组织化学研究方法

　　4.5.4 组织化学技术的注意事项

第五章 双光子荧光发色团

　5.1 双光子荧光染料的构一效关系

　　5.1.1 线性发色团

　　5.1.2 二维发色团

　　5.1.3 设计策略

　5.2 最新进展

　　5.2.1 侧基的引入降低δ值

　　5.2.2 芴优于咔唑作中心基团

　　5.2.3 三嗪八极体的δ值随支链增长而减小

　　5.2.4 双色团中的乙烯基桥能显著提高δ值

　　5.2.5 双共轭基团不宜用作共轭中心

　　5.2.6 共轭中心宜选用共轭体系大的基团

　　5.2.7 成像宜用分子小而δ值大的染料

　5.3 结论与展望

　5.4 参考文献

第六章 双光子荧光探针

　6.1 双光子荧光显微成像的优点

　6.2 双光子荧光探针设计的一般原理

　　6.2.1 双光子荧光探针发生作用的机理

　　6.2.2 双光子荧光团选取的依据

　6.3 双光子荧光探针的种类及其发展

　　6.3.1 双光子阳离子探针

　　6.3.2 双光子阴离子探针

　　6.3.3 双光子pH探针

　　6.3.4 双光子葡萄糖示踪器

　　6.3.5 双光子脂筏探针

　　6.3.6 双光子巯基探针

　　6.3.7 双光子半胱氨酸探针

　　6.3.8 双光子生物标记探针

　6.4 结论与展望

　6.5 参考文献

第七章 开发及应用实例一：双光子银离子探针

　7.1 引言

　7.2 实验仪器、试剂及方法

　7.3 合成路线的设计

　7.4 原料的制备

　7.5 目标化合物的合成[6]

　7.6 结果与讨论

　　7.6.1 探针DAg对金属阳离子的识别研究

　　7.6.2 探针DAg螯合银离子的研究

　　7.6.3 探针DAg的双光子吸收截面

　　7.6.4 探针DAg对银离子的核磁滴定

　　7.6.5 探针DAg用于活细胞中银离子的双光子显微成像

　　7.6.6 实样银离子含量的测定

　7.7 本章小结

　7.8 核磁图

　7.9 参考文献

第八章 开发及应用实例二：双光子锌离子探针

　8.1 引言

　8.2 实验仪器、试剂及方法

　8.3 合成路线的设计

　8.4 原料的制备

　8.5 目标化合物（DZn）的合成

　8.6 结果与讨论

　　8.6.1 探针DZn在水中的溶解性

　　8.6.2 探针DZn对金属阳离子的识别研究

　　8.6.3 探针DZn的双光子吸收截面

　　8.6.4 探针DZn对锌离子的核磁滴定

　　8.6.5 探针DZn用于活细胞中锌离子的双光子显微成像

　　8.6.6 探针DZn的光稳定性

　　8.6.7 探针DZn的细胞毒性

　8.7 本章小结

　8.8 核磁图

　8.9 参考文献